進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須優(yōu)化一抗和二抗的量以減少背景并確保獲得足夠的信號(hào)。我們的促旋酶多克隆抗體和單克隆抗體已經(jīng)過(guò)測(cè)試，可以減少進(jìn)一步優(yōu)化的需要。*

如果已加入純蛋白，則應(yīng)將一抗稀釋 1:1,000；如果加入細(xì)胞裂解物，則應(yīng)將一抗稀釋 1:200。稀釋液通常在洗滌緩沖液（1X TBS、0.1% Tween 20、1% 脫脂奶粉）中進(jìn)行，每片印跡 20 ml，孵育 1 小時(shí)。用洗滌緩沖液洗滌以去除一抗后，將二抗以 1:5,000 的稀釋度加入洗滌緩沖液中（多克隆抗體為抗兔抗體，單克隆抗體為抗鼠抗體）。

然后可以使用標(biāo)準(zhǔn)比色法或化學(xué)發(fā)光法對(duì)印跡進(jìn)行可視化。

* 優(yōu)化條件適用于 SDS-PAGE 微型凝膠，其中每條泳道中裝有 1 µg 蛋白質(zhì)樣品（純化蛋白質(zhì)或細(xì)胞提取物），凝膠在印跡前在標(biāo)準(zhǔn) SDS-PAGE 條件下運(yùn)行（43 kDa 蛋白質(zhì) 200 mA 運(yùn)行 45 分鐘或 90 kDa 或 97 kDa 蛋白質(zhì) 200 mA 運(yùn)行 60 分鐘）。

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